培養(yǎng)基常用的滅菌方法

2022-07-05 17:33:17

培養(yǎng)基常用的滅菌方法

   培養(yǎng)基是適于細菌生長繁殖需要的各種營養(yǎng)物質人工配制而成的基質。按營養(yǎng)成分和用途不同，分為基礎、合成、營養(yǎng)、鑒別、選擇和厭氧培養(yǎng)基。按物理形態(tài)分為固體、半固體和液體三類。根據(jù)細菌的種類和培養(yǎng)目的不同，可采用不同的培養(yǎng)基。

1、滅菌方法

    培養(yǎng)基的滅菌方法主要有兩種，濕熱滅菌及0.22μm微孔濾膜過濾除菌。與過濾相比，高壓蒸汽滅菌的工作強度小，成本較低但易造成營養(yǎng)成分的流失，而且在多次加樣（無菌谷氨酰胺溶液，無菌碳酸氫鈉溶液等）過程中容易造成二次污染。大多數(shù)培養(yǎng)基采用0.1～0.2μm孔徑的微孔濾膜進行過濾除菌，并且已成為培養(yǎng)基除菌的發(fā)展方向，它可低限度地減少培養(yǎng)基的營養(yǎng)損失。

1.1 濕熱滅菌
    蒸汽在冷凝時釋放出大量潛能，并且蒸汽具有強大穿透力，蒸汽的濕熱破壞菌體蛋白質和核酸的化學鍵使酶失活，微生物因代謝障礙而死亡。濕熱滅菌的效果取決于致死溫度和致死時間。致死溫度是殺滅微生物的極限溫度。致死時間是在致死溫度下殺滅全部微生物所需時間。
    高壓蒸汽滅菌適合于耐高溫培養(yǎng)基、接種器械和蒸餾水的滅菌。滅菌時一般是在121℃、15psi，15分鐘的條件下完全可達到滅菌效果及營養(yǎng)成分的最小損失，不需將滅菌時間延長。為保證高壓滅菌的效果，滅菌設備的驗證很關鍵。

1.2 過濾滅菌
   可供過濾滅菌使用的濾膜很多，其材料多為聚醚砜（PES）膜、聚偏二氟乙烯（PVDF）膜、聚四氟乙烯（PTFE）膜、醋酸纖維素、硝酸纖維素等等。一般采用正壓過濾，正壓過濾較之負壓過濾具有高流速、過濾快、不易污染，可避免蛋白質產(chǎn)生大量氣泡等優(yōu)點。

   目前大多數(shù)實驗室和制藥企業(yè)采用微孔濾膜、一體式過濾器（囊式過濾器）或筒式濾芯除菌。微孔濾膜需配套不銹鋼夾具，中間可夾放0.22um濾膜。使用這種濾器最重要步驟是安裝濾膜及無菌過濾過程。筒式濾芯亦需配套不銹鋼濾殼。如果是少量過濾(<200ml)可選配針頭過濾器。